DHI尿素氮标准曲线的制作和标定

1 前言

在DHI测定过程中，尿素氮的测定是近几年的一个热点，也是一个难点。主要是因为尿素氮在牛奶当中的含量比较低，一般在10-20mg/dL，而脂肪、蛋白质和乳糖的含量要远远高于尿素氮，再加上尿素氮的测定受温度的影响比较大，使得尿素氮测定成为近年来测定的难点。

本文采用尿素氮测定仪对牛奶当中尿素氮进行测定。配制尿素氮标准系列，并对标准系列进行定值，用于红外乳成份仪器尿素氮的校准。

2 标准系列的配制

2.1 尿素标准溶液的配制

采用分析纯尿素（天津基准化学试剂有限公司，批号20110320），相对分子质量为60.06。称取尿素1.0273g（精确到0.0001g）,溶解定容到250mL容量瓶中，其尿素浓度为4.1092mg/mL，尿素氮浓度为4.1092*0.4662=1.9157mg/mL 。

2.2 标准系列的配制

准备1000毫升生鲜牛乳，添加一定量的防腐剂。也可以采用联机系统测定完的样品进行混合。

在100毫升容量瓶中，加入25毫升水，再用牛奶定容到100毫升，此为标准曲线的第一个点。因为一般很难找到尿素氮含量较低的样品，故采用稀释的方法降低标准系列第一个点的尿素氮含量。但如果水在牛奶的比例太大，可能会改变牛奶的基质，在仪器上会得到不准确的结果。

第二个点采用正常的牛奶，第三到第八个点，分别加入尿素标准溶液1-6毫升，并用牛奶定容到刻度，并计算标准系列的理论尿素氮含量值，结果见表1。

从表1和表2可以看出，理论计算的尿素氮值和实际测定的值有一些差距，可能尿素氮标准溶液中的尿素氮和牛奶当中的尿素氮形态稍微有所差异导致。计算两者之间的回收率，结果见表3。

3 联机系统的校准 3.1校正 将尿素氮测定结果输入联机系统软件，对尿素氮进行校正。结果见表4。

经过使用尿素氮标准系列校准红外乳成份仪器后，尿素氮斜率为1.0000，截距为0.0000。从图1也可以看出校准后测定值也逐渐接近于校准直线。说明本次校准效果极佳。

3.2 控制样的检查 当校正完毕后，用有值的控制样进行检查，检验校正效果的好坏。对控制样进行连续11次测定，控制样结果见表5。

经检测控制样Ⅰ、Ⅱ，平均值为7.9、19.30；STD为0.05、0.05，仪器公司提供的承诺值STD≤1.75%,控制样测定值稳定性较好；CV（%）为0.64、0.30，符合仪器供应商提供的的承诺值CV<1.5%。说明本次红外乳成份仪器校准成功，仪器测定值更接近于实际校准值。检测数据更加准确。

4 结果讨论 4.1 尿素氮标准系列稳定性实验 对配制好的尿素氮标准系列，每经过24小时测定一次，连续测定6次，看尿素氮的变化情况，结果见表6。